Invitrogen™ SuperScript™ III CellsDirect™ cDNA Synthesis Kit

Beschreibung

Das SuperScript™ III CellsDirect™ cDNA-Synthese-Kit verwendet ein einfaches Protokoll, das weniger als 2 Stunden dauert. Lyse und reverse Transkription werden im gleichen Röhrchen durchgeführt, und die daraus resultierende Erststrang-cDNA ist für Klonierung und PCR einsatzbereit.

• Kompatibel mit einer Vielzahl von Säugetierzelltypen, die unter verschiedenen Behandlungsbedingungen kultiviert werden
• Das Einzelröhrchenformat minimiert den Reagenzienverlust, den Probenverlust und die Bearbeitungszeit
• Das Gesamtlysatvolumen wird bei der Erststrang-Synthesereaktion für cDNA verwendet, wodurch eine begrenzte Anzahl von Zellen mit höheren Erträgen erzielt wird und seltene Transkripte nachgewiesen werden können.
• SuperScript™ III Reverse Transkriptase mit verringerter RNase H-Aktivität und höherer thermischer Stabilität erzeugt hohe Ausbeuten an cDNA in der Erststrang-Synthesereaktion für eine höhere Empfindlichkeit und einen verbesserten Nachweis seltener Transkripte.
• Erzeugt hochwertige cDNA für die Verwendung in einer Vielzahl von Anwendungen, einschließlich Klonierung und PCR

Funktionsweise
Bei der herkömmlichen RT-PCR muss in einem sehr zeitaufwändigen Verfahren zuerst RNA aus Zellen isoliert werden, was zu Materialverlust führen kann. Mit dem SuperScript™ III CellsDirect cDNA-Synthesesystem werden die Zellen lysiert und die cDNA aus dem Lysat in einem einzigen Röhrchen mit minimalem Aufwand und ohne Probenverlust erzeugt. DNase I wird zugegeben, um genomische DNA vor der Erststrangsynthese zu eliminieren. Dieses Kit wurde für kleine Zellproben optimiert, von 10.000 Zellen bis hin zu einer einzelnen Zelle (gemessen mittels serieller Verdünnung). Die Verwendung von SuperScript™ III Reverse Transkriptase gewährleistet eine hohe Spezifität und hohe Ausbeuten von cDNA aus kleinen Mengen des Ausgangsmaterials, wenn nur 10 pg Gesamt-RNA verwendet wird. Nach der Synthese kann die Erststrang-cDNA mit spezifischen Primern mittels PCR amplifiziert werden, ohne dass Zwischenschritte wie organische Extraktionen oder Ethanolfällungen notwendig sind.